Essenciais de processamento de tecidos: das etapas iniciais ao papel crítico da fixação

O processamento de tecidos é um procedimento sequencial vital para a preparação de amostras biológicas para estudo microscópico. Este artigo apresenta as etapas fundamentais envolvidas neste processo. Com um foco particular, exploraremos a importância crítica da fixação, a etapa inicial que estabelece as bases para a preservação do tecido bem-sucedida e uma interpretação histológica precisa.

Introdução aos passos de processamento de tecido

O processamento de tecidos é uma etapa crucial na histologia que prepara as amostras de tecido para exame microscópico, convertendo o tecido fresco em uma forma que pode ser facilmente seccionada e corada. O objetivo é preservar a estrutura do tecido e os detalhes celulares, tornando-o adequado para diagnóstico e pesquisa precisos. Existem várias etapas importantes em todo o processo. Cada etapa no processamento do tecido é vital para preservar os detalhes microscópicos da amostra e garantir uma avaliação patológica precisa.

Fixação

Esta é a primeira e mais importante etapa em que os tecidos são preservados para prevenir a decomposição e manter a integridade estrutural. Fixadores comuns como a formalina interrompem a atividade enzimática e o crescimento bacteriano, ajudando a estabilizar o tecido para processamento posterior.

Desidratação

A água é removida do tecido usando concentrações crescentes de álcool. Como meios de incorporação como parafina não são solúveis em água, a desidratação completa é necessária para preparar o tecido para as próximas etapas sem distorção.

Clareira

O álcool no tecido é substituído por um agente de limpeza, geralmente xileno ou um substituto de xileno, que é compatível com álcool e parafina. A limpeza torna o tecido translúcido e o prepara para infiltração.

Infiltração

O tecido está saturado com cera de parafina fundida. Este processo dá ao tecido firmeza suficiente para ser cortado em seções ultrafinas para análise microscópica sem perder sua estrutura interna.

Incorporação (etapa de pós-processamento)

Após o processamento, os tecidos são embutidos em blocos de parafina. Esta etapa alinha e orienta o tecido corretamente antes de ser seccionado em um micrótomo e montado em lâminas.

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Qual é o passo mais crítico no processamento de tecidos?

A fixação é o primeiro passo e desempenha um papel vital na preservação da estrutura do tecido e na prevenção da degradação. Envolve o uso de agentes químicos-comumente formalina (formaldeído)-para interromper todas as reações bioquímicas e estabilizar as estruturas celulares e teciduais. Por que a fixação é tão importante?

Previne autólise e putrefação

As células contêm enzimas que podem quebrar os tecidos (autólise) logo após a morte. Se não forem corrigidas rapidamente, essas enzimas causam perda estrutural. A fixação interrompe esses processos. Também impede o crescimento bacteriano (putrefação), o que protege ainda mais a integridade do tecido.

Preserva Morfologia

A fixação adequada mantém a aparência normal e a relação das células e tecidos. Ele garante que características diagnósticas como núcleos, citoplasma e matriz extracelular permaneçam claramente visíveis ao microscópio.

Permite a Penetração de Reagente

O tecido bem fixado permite que os reagentes (como álcool e parafina) penetrem com eficácia durante os estágios posteriores. Tecidos mal fixados podem ter canais de difusão bloqueados, levando à desidratação, limpeza e infiltração incompletas.

Suporta coloração de alta qualidade

Muitas manchas histológicas, como Hematoxilina e Eosina (H & E), dependem de uma boa fixação para produzir coloração clara, nítida e interpretável. A fixação inadequada pode resultar em resultados de coloração fracos, desiguais ou falsos.

Impacto irreversível

Ao contrário das etapas posteriores (por exemplo, desidratação ou limpeza), os erros na fixação não podem ser corrigidos. Uma vez que um tecido é subfixado ou superfixado, sua estrutura pode ser permanenteNtly alterado ou destruído, afetando todo o processo de diagnóstico.

Processo de Fixação no Processamento de Tecido

A fixação é a etapa fundamental no processamento de tecidos, servindo para preservar os espécimes de tecido o mais próximo possível de um estado de vida. Uma vez que um tecido é removido do corpo, ele começa a se degradar rapidamente devido à atividade enzimática (autólise) e invasão bacteriana (putrefação). Para evitar isso, o tecido deve ser colocado rapidamente em uma solução fixadora-geralmente 10% de formalina tamponada neutra. Este produto químico estabiliza proteínas e estruturas celulares, efetivamente “travando” o tecido em seu estado atual para prevenir a decomposição e manter a morfologia para avaliação microscópica.

Antes da fixação, o tecido é normalmente aparado em seções menores e finas-geralmente não mais espesso do que 3-5 milímetros. Isso garante que o fixador possa penetrar em toda a amostra de maneira uniforme e eficiente. O volume de fixador usado também é importante; deve ser pelo menos 10 a 20 vezes o volume do tecido. Uma vez imerso, o espécime permanece no fixador por um período especificado-geralmente entre 6 e 24 horas-dependendo do tipo de tecido, tamanho e nível desejado de preservação. A subfixação pode deixar o tecido vulnerável à quebra, enquanto a superfixação pode causar endurecimento ou mascaramento dos detalhes celulares.

Após a fixação, o tecido pode ser enxaguado para remover o excesso de fixador e prepará-lo para as etapas de processamento subsequentes, como desidratação, limpeza e infiltração de parafina. A fixação adequada não apenas preserva os detalhes estruturais, mas também afeta significativamente a qualidade da coloração e a facilidade de seccionamento. Como todos os processos a jusante dependem de tecido bem fixado, a fixação é considerada a etapa mais crítica na preparação do tecido para análise histológica.

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