Introdução ao Processamento Organizacional

“Processamento de tecidos” refere-se a uma série de etapas necessárias que preparam o tecido animal ou humano desde o estágio de fixação até o estado de ser suficientemente infiltrado com cera histológica apropriada, permitindo que seja seccionado em um micrótomo.

A importância do processamento de tecidos

Os gerentes de laboratório costumam enfatizar a importância do processamento de tecidos para sua equipe. É crucial entender que usar um cronograma de processamento inadequado ou cometer erros fundamentais (como reabastecimento incorreto ou sequenciamento de reagentes) pode resultar em espécimes de tecido não sendo seccionáveis. Isso significa que eles não produzirão nenhuma informação visual útil. Esta situação é particularmente grave em tecidos de diagnóstico humano porque espécimes inteiros são processados em um único lote. Se o tecido for danificado em tais casos, pode não haver tecido sobressalente disponível para análise posterior, levando a uma situação em que o laboratório deve explicar ao paciente por que um diagnóstico não pôde ser feito. Embora falhas mecânicas ou elétricas doMáquina automática de processamento de tecidosPode ocorrer, a maioria dos problemas de processamento são causados por erros humanos. Portanto, enfatizar a importância de uma educação e treinamento adequados para o pessoal de processamento de tecidos é crucial. O cuidado deve ser exercido ao configurar programas de processamento para qualquer execução para garantir os melhores resultados.

Visão geral das etapas de processamento de tecido da seção de parafina

1. coletar amostras frescas

Amostras de tecido fresco vêm de várias fontes e são propensas a danos quando removidas de pacientes ou animais experimentais. Portanto, eles devem ser manuseados com cuidado e corrigidos o mais rápido possível após a dissecção. Idealmente, a fixação deve ocorrer no local de extração, como na sala de cirurgia. Se isso não for viável, deve ser corrigido imediatamente após a chegada ao laboratório.

2. fixação

O espécime é imerso em um fixador líquido, como uma solução de formaldeído como a formalina. Este agente se infiltra gradualmente no tecido, induzindo mudanças químicas e físicas que endurecem e preservam o tecido enquanto o protegem durante os estágios de processamento subsequentes. Apenas alguns reagentes são adequados para fixação porque devem ter propriedades específicas adequadas a esta tarefa. Por exemplo, os componentes do tecido devem reter uma certa reatividade química para aplicar técnicas específicas de coloração posteriormente. A formalina (geralmente tamponada com fosfato) é o fixador mais comumente usado para preservar tecidos que serão processados em seções de parafina. Idealmente, os espécimes devem permanecer na solução de fixação por tempo suficiente para se infiltrar em todas as partes do tecido, seguido por um período que permite que a reação química de fixação se equilibre (tempo de fixação). Geralmente, o tempo de fixação para os espécimes deve ser de 6 a 24 horas. A maioria dos laboratórios considera o passo de fixação como o primeiro estágio do programa de processamento. Após a fixação, os espécimes podem exigir dissecção adicional para selecionar as áreas apropriadas para avaliação. Os espécimes processados são colocados em cassetes devidamente rotulados (pequenos cestos perfurados) para diferenciá-los de outros espécimes. A duração do manuseio da amostra depende do tamanho e do tipo dos maiores e menores espécimes, do processador específico usado, dos solventes escolhidos, da temperatura do solvente e de outras variáveis.

3. desidratação

Como a cera de parafina fundida é hidrofóbica (não se mistura bem com água), é necessário remover a maior parte da água das amostras antes da infiltração de cera. Esse processo normalmente envolve a imersão das amostras em uma série de soluções de etanol (álcool) de concentração crescente, culminando em etanol absoluto. O etanol pode se misturar com a água em qualquer proporção, substituindo gradualmente a água nas amostras por álcool. Usando uma sequência de concentração gradualmente crescente minimiza a deformação excessiva do tecido.

Para amostras não mais espessas do que 4mm, uma sequência típica de desidratação é:

70% etanol 15 minutos

90% etanol 15 minutos

100% etanol 15 minutos

100% etanol 15 minutos

100% etanol 30 minutos

100% etanol 45 minutos

Nesse ponto, toda a água da amostra, exceto para quantidades mínimas de água fortemente ligada (molecular), deve ser removida.

4. compensação

Lamentavelmente, embora o tecido agora tenha um teor mínimo de água, ainda não podemos infiltrá-lo com cera porque a cera e o etanol não se misturam bem. Portanto, um solvente intermediário compatível com etanol e cera de parafina deve ser usado. Este solvente substituirá o etanol no tecido, que será então substituído por cera de parafina fundida. Essa fase do programa é chamada de “limpeza” e os produtos químicos usados são conhecidos como “agentes de limpeza”. O termo “limpeza” foi escolhido porque muitos (mas não todos) agentes de limpeza, devido ao seu índice de refração relativamente alto, podem fornecer algum grau de clareza óptica ou transparência ao tecido. Outro críticoFunção dos agentes de limpeza é remover grandes quantidades de gordura do tecido, pois a gordura impediria a infiltração de cera.

O xileno é um agente de limpeza comumente usado, exigindo várias mudanças para substituir totalmente o etanol.

Para espécimes não mais espessos do que 4mm, uma sequência de limpeza típica inclui: Xileno 20 minutos, Xileno mais 20 minutos, Xileno 45 minutos.

5. Infiltração de cera

Nesta fase, o tecido é infiltrado com cera histológica apropriada. Embora muitos reagentes diferentes tenham sido avaliados e usados ao longo dos anos para realizar essa tarefa, a cera histológica à base de parafina continua sendo a mais amplamente utilizada. A cera padrão permanece líquida a 60 ° C e pode ser introduzida no tecido nesta temperatura, então resfriada a 20 ° C para solidificar em uma textura adequada para seccionamento consistente. Estas ceras são compostas de parafina purificada e vários aditivos, possivelmente incluindo resinas como estireno ou polietileno. É essencial entender que esses componentes têm propriedades físicas específicas, permitindo que a cera seja seccionada em fatias finas tão estreitas quanto 2 mícrons, formando fitas quando cortadas em um micrótomo, e manter flexibilidade suficiente para permanecer plano quando flutuado em um banho de água morna.

Para amostras não mais espessas do que 4mm, uma sequência de infiltração típica é:

Cera 30 minutos

Cera 30 minutos

Cera 45 minutos

6. Incorporação ou bloqueio

Uma vez que os espécimes foram completamente infiltrados com cera, eles precisam ser moldados em um “bloco” para serem montados em um micrótomo para seccionamento. Este processo envolve o uso de um “centro de incorporação”, onde a cera fundida é despejada em um molde e a amostra é colocada nele. É crucial prestar atenção extra à orientação adequada do espécime dentro do molde, pois a posição do espécime ditará o “plano de seção” que é vital em histologia de diagnóstico e pesquisa. Um anel de incorporação é então colocado no topo do molde, mais cera é adicionada e todo o conjunto é colocado em uma placa fria para solidificar. Assim que esse processo for concluído, o bloco de tecido junto com seu anel de incorporação anexado pode ser removido do molde, pronto para microtomia. É importante notar que, se o processamento do tecido for feito corretamente, o bloco de cera contendo a amostra de tecido é altamente durável e pode servir como um material de arquivo essencial.